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本试剂盒在一管内融合了基因组清除与RNA逆转录所需的所有其他组分，只需要添加模板和水即可进行反应。本试剂盒采用特殊优化的第三代逆转录酶，具有快速及耐受性强的特性，搭配热敏HL-dsDNase，并对buffer进行优化，最快可在5min内完成基因组清除和逆转录反应，适合低拷贝样本的反转录以及能够耐受复杂样本。

• 便捷快速：逆转录反应和基因组去除所需的所有组分在一管内；
  
• 简单高效：5min即可完成基因组清除和逆转录反应；
  
• 高耐受性：复杂样本亦可兼容，抗干扰性较好。

• 用DEPC处理实验用到的所有实验器材，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，实验过程戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
  
• 确保所用试剂中无RNA酶污染。
  
• 试剂盒要严格密封保存。在逆转录过程中，所有管子要确保扣严。
  
• 纯化过的RNA必须保证不含有盐，金属离子，乙醇和苯酚，以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
  
• 为保证逆转录反应的有效进行，需使用高质量的RNA模板。
  
• 当模板含量较低或后续PCR扩增片段过长时可以适当延长逆转录时间。
  
• 4×All-in-one RT SuperMix含有甘油，使用前请混匀后并短暂离心收集至管底再进行使用。

• 使用前准备：请上下颠倒混合均匀，避免起泡，并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，避免污染。建议反应体积为20～50μL。
  
• 实验优化建议：可适当延长反应时间来提高逆转录效率，如将50℃ 5min调整至5～15min。

• 常用反应体系（20μL）
  

  成分	用量
  4×All-in-one RT SuperMix	5μL
  Total RNA	1pg～1μg
  RNase-Free Water	至20μL

• 反应程序
  

  温度	时间
  50℃	5min
  85℃	5sec

  • 延长反应时间可提高cDNA得率，5～15min均可。
• 产物可立即用于qPCR反应，或在-20℃保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后于-70℃保存，cDNA应避免反复冻融。